重组人FOXL2基因的原核表达和纯化研究

目的通过pET32a（＋）原核表达载体,表达重组人叉头框蛋白L2（human forkhead box12,FOXL21）。并且进行纯化和鉴定。方法从正常人血液中提取基因组DNA,利用PCR扩增FOXL21目的基因片段,构建FOXL21原核表达重组质粒[pET32a（＋）-FOXL21]并转化E．coli的BL21（DE3）菌株,IPTG诱导重组蛋白表达,经HisTrap FF亲和层析柱纯化,再通过SDS—PAGE和Western印迹鉴定。结果成功克隆到大小为1131bp的人源FOXL21基因片段并准确插入表达载体pET32a（＋）,0．1mmol／LIPTG诱导转化菌8h可表达大量的FOXL21蛋白,并可经HisTrap FF柱亲和层析得到高度纯化。结论成功获得纯化的66kD重组人FOXL21蛋白,为后续进行FOXL21蛋白的功能研究奠定了基础。     

东北红豆杉多糖的化学研究

利用水提醇沉提取东北红豆杉多糖TP,经超滤得到超滤外液TP-1和内液TP-2。TP-2进行部分酸水解和凝胶柱层析分离纯化,得到TP-2-1a。通过对理化性质、分子量、单糖组成和甲基化测定结果分析,确定其分子量分布在7.0 kDa左右,糖组成由Rha、Man、Gal、Glu、GalA和GlcA构成,摩尔比为:16.9∶1.0∶15.5∶1.3∶9.9∶2.5,中性糖以Gal的1→3、1→4连接为主,在1→3连接的O-6位上有分支;Rha以1→2连接为主,在O-4位上有分支;Man以1→4、1→6连接为主;Glu以1→3、1→4连接为主;非还原末端主要是Gal及少量的Man、Glu和Rha。酸性糖以1→4连接GalA为主,无分支。该多糖为首次从东北红豆杉中分离得到。     

刈割对克氏针茅草原群落优势与亚优势植物的影响

基于内蒙古中部克氏针茅草原长期刈割试验,分析了不同留茬高度下克氏针茅草原植物群落中5个优势及亚优势种地上生物量和群落稳定性的变化.结果表明:留茬高度在10cm以上时对5种植物地上生物量的影响较小.留茬高度为10 cm适于冷蒿生长,而不利于克氏针茅的生长.糙隐子草在留茬高度为2 cm时表现最佳.黄囊苔草对群落的贡献在留茬高度为5 cm时最大,此时其生物量与刈割年限呈正相关.留茬高度为2和15 cm不利于星毛委陵菜生长.植株较高、竞争力强的多年生植物对干扰的耐受能力较强,刈割的留茬高度不低于10cm时,有益于维持草原生态系统的稳定性.     

环境中人为来源的铂族元素及其迁移转化研究进展

铂族元素(PGEs)在汽车尾气催化转换器(VECs)、工业催化剂和制药学领域的广泛应用,致使PGEs尤其是铂(Pt)、钯(Pd)和铑(Rh)在某些区域已经成为新型环境污染物.由于环境样品中Pt/Pd、Pt/Rh与VECs中活性成分比例有较好的相关性,因此PGEs污染主要来源于应用了铂族金属的VECs.研究显示,过去的30年里,气溶胶、永生态系统(河水、雨水、地下水、海水、沉积物)、土壤、路尘和生物有机体等不同环境介质中PGEs浓度均显著增加.人们普遍认为铂族元素是惰性的,暴露于环境中的PGEs的健康风险很小,但PGEs毒性和生物可利用性的研究表明,在多种生物地球化学过程作用下,人为排放的PGEs易发生迁移,转化为毒性更大的形态,增加生物可利用性,通过食物链传递对人类产生潜在的健康风险.本文对不同环境介质中PGEs来源、分布及生物地球化学行为的最新成果进行了总结,认为PGEs人体健康风险标准制定、PGEs标准物质的研制、近海沉积物中PGEs的研究、PGEs对滩涂贝类的毒性、食物中PGEs的污染现状及人体健康风险评估等是今后PGEs研究的重要领域.     

Screening and identification of a fungal strain affecting hydroxylation of naringin

柚皮苷是中草药枳实、橘红的主要有效成分,用于心血管疾病的防治.为了开发生物法生产柚皮苷的羟基化衍生物,从土壤中分离筛选到一株能转化柚皮苷为3'-羟基柚皮苷和3',5'-二羟基柚皮苷的真菌菌株NT-02.通过对菌株NT-02的形态学观察和ITS序列系统发育分析,构建了系统发育树,NT-02菌株与哈茨木霉(Trichoderma harzianum/Hypocreaum lixii)形成一个类群,且有99％的同源性,初步鉴定真菌NT-02为木霉属(Trichoderma)菌株.     

响应面法优化产酰胺酶发酵培养基

采用响应面分析方法,对阿萨希丝孢酵母（Trichosporon asahii）ZZB-1产酰胺酶的发酵培养基进行了优化。运用单N子试验筛选出麦芽糖和酵母浸膏为最适碳源、氮源,金属离子Ca^2＋、Mn^2＋可提高发酵酰胺酶产量;通过最陡爬坡实验逼近以上4个因子的最大响应区域后,采用Box—Behnken响应面分析法,确定产酰胺酶最佳发酵培养基为麦芽糖18．84g／L、酵母浸膏9．55g／L、NaC15g／L、KH2PO41g／L、MgSO4·7H2O0．2g／L、FeS040．001g／L、CaC0370．84μmol／L、MnS0465．39肚mo[／L（1％丙烯酸诱导）,NH4·H2O调节pH至7．0。培养基优化后酰胺酶产量由初始2554U／L提高到4156U／L,为原始发酵培养基配方酶活产量的1．63倍。     

一株柚皮苷羟基化真菌的筛选及鉴定

柚皮苷是中草药枳实、橘红的主要有效成分,用于心血管疾病的防治。为了开发生物法生产柚皮苷的羟基化衍生物,从土壤中分离筛选到一株能转化柚皮苷为3’-羟基柚皮苷和3’,5’-二羟基柚皮苷的真菌菌株NT-02。通过对菌株NT-02的形态学观察和ITS序列系统发育分析,构建了系统发育树,NT-02菌株与哈茨木霉（Trichoderma harzianum／Hypocreaum lixii）形成一个类群,且有99％的同源性,初步鉴定真菌NT-02为木霉属（Trichoderma）菌株。     

柠檬和莱檬果皮精油挥发性成分分析

利用气质联用技术(GC-MS),对云南德宏栽培的小莱檬、塔西提2个莱檬品种和费米耐劳、尤力克、艾伦尤力克3个柠檬品种的果皮精油挥发性成分进行研究。结果表明,小莱檬、塔西提、费米耐劳、尤力克、艾伦尤力克柠檬果皮精油中分别检测到17、24、23、20、27种挥发性成分,烯烃类物质是莱檬和柠檬果皮精油挥发性的主要组分,其中特征香气成分D-柠檬烯含量最高,β-蒎烯、γ-萜品烯次之。塔西提莱檬特征香气成分物质种类和含量高于小莱檬,艾伦尤力克柠檬中烃类、醇类、醛类、酯类和酮类物质的种类和含量均高于费米耐劳柠檬和尤力克柠檬,主要特征香气成分含量也最高。     

Dynamic regulation of the cerebral cavernous malformation pathway controls vascular stability and growth

Cardiovascular growth must balance stabilizing signals required to maintain endothelial connections and network integrity with destabilizing signals that?enable individual endothelial cells to migrate and proliferate. The cerebral cavernous malformation (CCM) signaling pathway utilizes the adaptor protein CCM2 to strengthen endothelial cell junctions and stabilize vessels. Here we identify a CCM2 paralog, CCM2L, that is expressed selectively in endothelial cells during periods of active cardiovascular growth. CCM2L competitively blocks CCM2-mediated stabilizing signals biochemically, in cultured endothelial cells, and in developing mice. Loss of CCM2L reduces endocardial growth factor expression and impairs tumor growth and wound healing. Our studies identify CCM2L as a molecular mechanism by which endothelial cells coordinately regulate vessel stability and growth during cardiovascular development, as well as postnatal vessel growth.     

rhG-CSF动员对供者CD4^＋T细胞免疫表型和功能影响

目的：研究重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员对供者CD4＋T细胞表面分子淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、L-选择素（LAM-1）和人整合素-4（VLA-4）的表达及其介导的CD4＋T细胞功能的影响,探讨外周血干细胞移植过程中CD4＋T细胞免疫耐受机制。方法：使用三色荧光标记检测动员前及动员后第5天供者外周血LFA-1、ICAM-1、LAM-1和VLA-4的表达率,ELISA方法检测动员前后CD4＋T细胞分泌IFN-γ和IL-4能力,免疫磁性分选法分离纯化CD4＋T细胞,检测动员前后CD4＋T细胞对基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）的迁移能力和对ICAM-1的黏附能力。结果：动员前后CD4＋T细胞LFA-1（CD11a）和VLA-4（CD49d）表达率差异无统计学意义（P〉0.01）,动员前后CD4＋T细胞LAM-1（CD62L）和ICAM-1（CD54）的表达率差异均有统计学意义,动员前显著高于动员后（P〈0.01）;动员前后CD4＋T淋巴细胞向SDF-1α的迁移率差异无统计学意义（P〉0.01）;动员后CD4＋T细胞对ICAM-1的黏附率降低（P〈0.01）;动员后IL-4和IFN-γ两个细胞因子在外周血血清的浓度均降低（P〈0.01）。结论：rhG-CSF动员不影响CD4＋T细胞LFA-1和VLA-4表达及CD4＋T细胞迁移,但影响CD4＋T细胞ICAM-1和LAM-1表达以及CD4＋T细胞通过LFA-1对ICAM-1的黏附能力影响,并可能影响CD4＋T细胞分泌细胞因子IL-4及IFN-γ的功能。